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成功案例

ATS破壁機—胞內分枝杆菌破壁製備

引言:分枝杆菌屬( Mycobacterium)是一類細長略彎曲的杆菌,因有分枝生長的趨勢而得名。細胞壁含有大量脂質,主要是分枝菌酸,一般不易著色,若經加溫或延長染色時間而著色後能抵抗強脫色劑鹽酸乙醇的脫色,故又稱抗酸杆菌,且不易破壁。本次實驗ATS破壁機將樣品做兩(liang) 部分處理,對比破壁結果。

實驗對象 

 胞內(nei) 分枝杆菌

 實驗儀(yi) 器

■ 高速離心機

■ ATS破壁機

■ 顯微鏡

實驗背景

分枝杆菌屬( Mycobacterium)是一類細長略彎曲的杆菌,因有分枝生長的趨勢而得名。本菌屬的顯著特性為(wei) :①細胞壁含有大量脂質;②無鞭毛、無芽胞,也不產(chan) 生內(nei) 、外毒素;③對人致病的主要有結核分枝杆菌、牛分枝杆菌、麻風分枝杆菌;④所致感染多為(wei) 慢性過程,長期遷延並有破壞性的組織病變。

實驗難點

細胞壁含有大量脂質,主要是分枝菌酸,一般不易著色,若經加溫或延長染色時間而著色後能抵抗強脫色劑鹽酸乙醇的脫色,故又稱抗酸杆菌,且不易破壁

實驗目的

將胞內(nei) 分枝杆菌進行破壁,後續提取蛋白。

實驗工藝

1.預處理:將滅活後的胞內(nei) 分枝杆菌液體(ti) (非結核)分為(wei) 兩(liang) 部分,一部分不作處理;一部分做堿處理,離心後去上清加水再重懸。

2.實驗工藝:ATS破壁機搭配一級模塊後,控低溫處理。

實驗結果

圖片

A.未處理的菌液破壁結果

通過對菌液進行抗酸染色後觀察,破壁前菌液呈紫色,在破壁次數相同的條件下,隨著壓力的增高,胞內(nei) 分枝杆菌顏色偏向藍色。

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100倍油鏡顯示,壓力越高,破壁效果越好(壓力排序:A<B<C<D)

破壁前

破壁後

B.堿處理菌液破壁結果

同壓力同次數下,堿處理後的菌液破壁效果明顯提高。

          

           (堿處理)                   


(未處理)


實驗小結

1.從(cong) 染色結果和顯微鏡觀察結果可以看出,未處理的菌液經不同壓力處理後,都有一定程度的細菌破壁,且壓力越高,破壁效果越好。

2.堿處理有助於(yu) 破壁,比同壓力未處理的菌液破壁結果更好,細胞更細碎。