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成功案例

ATS破壁機—胞內分枝杆菌破壁製備

引言：分枝杆菌屬（ Mycobacterium）是一類細長略彎曲的杆菌，因有分枝生長的趨勢而得名。細胞壁含有大量脂質，主要是分枝菌酸，一般不易著色，若經加溫或延長染色時間而著色後能抵抗強脫色劑鹽酸乙醇的脫色，故又稱抗酸杆菌，且不易破壁。本次實驗ATS破壁機將樣品做兩(liang) 部分處理，對比破壁結果。

實驗對象 

■ 胞內(nei) 分枝杆菌

 實驗儀(yi) 器

■ 高速離心機

■ ATS破壁機

■ 顯微鏡

實驗背景

分枝杆菌屬（ Mycobacterium）是一類細長略彎曲的杆菌，因有分枝生長的趨勢而得名。本菌屬的顯著特性為(wei) ：①細胞壁含有大量脂質；②無鞭毛、無芽胞，也不產(chan) 生內(nei) 、外毒素；③對人致病的主要有結核分枝杆菌、牛分枝杆菌、麻風分枝杆菌；④所致感染多為(wei) 慢性過程，長期遷延並有破壞性的組織病變。

實驗難點

細胞壁含有大量脂質，主要是分枝菌酸，一般不易著色，若經加溫或延長染色時間而著色後能抵抗強脫色劑鹽酸乙醇的脫色，故又稱抗酸杆菌，且不易破壁。

實驗目的

將胞內(nei) 分枝杆菌進行破壁，後續提取蛋白。

實驗工藝

1.預處理：將滅活後的胞內(nei) 分枝杆菌液體(ti) （非結核)分為(wei) 兩(liang) 部分，一部分不作處理；一部分做堿處理，離心後去上清加水再重懸。

2.實驗工藝：ATS破壁機搭配一級模塊後，控低溫處理。

實驗結果

圖片

A.未處理的菌液破壁結果

通過對菌液進行抗酸染色後觀察，破壁前菌液呈紫色，在破壁次數相同的條件下，隨著壓力的增高，胞內(nei) 分枝杆菌顏色偏向藍色。

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100倍油鏡顯示，壓力越高，破壁效果越好。（壓力排序：A<B<C<D）

破壁前

破壁後

B.堿處理菌液破壁結果

同壓力同次數下，堿處理後的菌液破壁效果明顯提高。

          

           （堿處理）                   


（未處理）


實驗小結

1.從(cong) 染色結果和顯微鏡觀察結果可以看出，未處理的菌液經不同壓力處理後，都有一定程度的細菌破壁，且壓力越高，破壁效果越好。

2.堿處理有助於(yu) 破壁，比同壓力未處理的菌液破壁結果更好，細胞更細碎。